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ELISA中双抗体夹心法与间接法的区别在哪

日期:2022-07-30 18:10
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摘要: ELISA中双抗体夹心法与间接法的区别在哪 双抗体夹心法: (1) elisa试剂盒包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗刷缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗刷,下同)。 (2) 加样:加必定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗刷。(一同做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。 (3) 加酶标抗体:于...

ELISA中双抗体夹心法与间接法的区别在哪

双抗体夹心法:

(1)elisa试剂盒包被:用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗刷缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗刷,下同)。

(2) 加样:加必定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗刷。(一同做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。

(3) 加酶标抗体:于各反应孔中,elisa试剂盒参与新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗刷。

(4) 加底物液显色:于各反应孔中参与暂时制作的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。

(5) 中止反应:于各反应孔中参与2M硫酸0.05ml。

(6)elisa试剂盒效果断定:可于白色布景上,直接用肉眼调查效果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号标明。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规矩的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。间接法:用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗刷3次。加必定稀释的待检样品(不知道抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗刷。(一同做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,参与新鲜稀释的酶标**抗体(抗抗体)0.1ml,37℃孵育30-60分钟,洗刷,终究一遍用DDW洗刷。其他进程同“双抗体夹心法”的4、5、6。


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