24孔板里293细胞转染后面的孔里细胞死亡原因

24孔板里293细胞转染后面的孔里细胞死亡原因

问：我在24孔板里做293细胞的转染，转染试剂是invitrogen的Lipofectamine2000。奇怪的是，每次加完DNA- Lipofectamine complex，24个孔当中的后面几个孔(比如*后6个孔)里的细胞就明显有一部分死亡，死亡率是10-30%，通常*严重的是*后两个孔。但是前面的孔里的细胞总是没有问题。用不同的DNA做实验，都发生同样的问题，就是总是后面的孔里细胞死亡，而前面的孔里细胞没问题。是怎么回事呢?

答：如果你在加DNA-Lipofectamine complex时孔板里是没有液体的，会在风机下风干的，很快的，这样你在加到后面的孔时，部分细胞已经干了，所以你先加的很好，后面的就有问题。解决办 法就是，你不要一起吸净所有孔的液体，6个孔为一个单位，吸弃孔里的液体，在加DNA-Lipofectamine complex，就可以了。